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微生物實驗中常用藥品試劑配制——染色劑



錄入時間:2011-3-25 9:26:04 來源:水世界

(六)染色劑
 
1、細菌染色劑
 
配方一 齊氏(Ziehl)石炭酸品紅染液
甲液 取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸餾水中。
乙液 取0.3克堿性品紅,放入研缽中研磨,逐漸加入10毫升95%酒精,繼續淹沒,使它溶解。
將甲液和乙液混合后,搖勻,過濾,裝瓶,備用。
 
配方二 羅氏(Loeffler's)美藍染液
甲液 取5克美藍,溶于100毫升95%酒精中,制成美藍-酒精飽和液。
乙液 取氫氧化鉀0.01克(或1%氫氧化鉀溶液1毫升),溶液也可用于放線菌染色,0.1%濃度可用于酵母菌染色。
 
配方三 革蘭氏(Gram's)染液
用此液染色因先用甲液染色,再加乙液固定,用丙液處理,最后用丁液復染。四種液體的配方如下:
甲液(結晶紫液)
(1)結晶紫 2克 95%酒精 20毫升
(2)草酸銨 0.8克 蒸餾水 80毫升
使用錢江(1)、(2)液相混,靜置48小時后使用。
乙液(碘液)
碘 1克 碘化鉀 2克 蒸餾水 300毫升
將碘化鉀溶于少量蒸餾水中,然后加入碘,待碘全部溶解后,加水稀釋至300毫升。
丙液 95%酒精溶液
丁液(番紅花紅液)
2.5%番紅花紅酒精溶液 10毫升 蒸餾水 100毫升
 
2、細菌特殊染色劑
 
配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后,用乙液復染。
甲液 取5克孔雀綠,加入少量蒸餾水,使它溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,即成孔雀綠染液。
乙液 取番紅花紅0.5克,加入少量蒸餾水,使它溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,集成番紅花紅復染液。
 
配方二 莢膜染液 此配方先用甲液染色,后用乙液復染。
甲液 取結晶紫0.1克,溶于少量蒸餾水后,加水稀釋到100毫升,再加入0.25毫升冰醋酸一結晶紫染液。
乙液 取硫酸銅31.3克,溶于少量蒸餾水后,加水稀釋到100毫升,即成20%硫酸銅脫色劑。
 
配方三 鞭毛染液
甲液
飽和明礬溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升
20%丹寧酸溶液 2毫升
乙液
堿性品紅 11克 95%酒精 100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混,過濾即可。
 
3、植物細胞壁染色劑
 
配方一 纖維素細胞壁染液(Ⅰ)
取固綠0.1克,溶于100毫升95%酒精中,即成0.1%固綠-酒精溶液。
該液能染色纖維素細胞壁,還用于動植物中作漿質染色劑。
 
配方二 纖維素細胞壁染液(Ⅱ)
氯化鋅 20克 碘化鉀 6.5克
碘 1.5克 蒸餾水加至100毫升
先把氯化鋅溶于少量蒸餾水中,再加入6.5克碘化鉀,在碘完全溶解后,用蒸餾水稀釋到100毫升,即成碘-氯化鋅溶液。
該染液能把細胞壁染成紫色,胞質染成淡黃色,胞核染成棕色。
 
配方三 纖維素細胞壁染液(Ⅲ)
甲液 取1克碘和1.5克碘化鉀,溶于100毫升蒸餾水中,即成1%碘液。
乙液 取7份硫酸和3份蒸餾水相混,即成66.5%硫酸溶液。
染色時,在材料上滴加甲液,再加一滴乙液,纖維素細胞壁就染成黃色。
 
配方四 木質化細胞壁染液(Ⅰ)
硫酸化苯胺(或鹽酸話本安) 1份
蒸餾水 70份 95%酒精 30份
硫酸 30份
將上述各組分相混,將細胞材料放入混合液里染色,可是木質化細胞壁呈鮮黃或姜黃色。
 
配方五 木質化細胞壁染液(Ⅱ)
取間苯三酚4~5克,溶于100毫升95%酒精中,即成間苯三酚-酒精液。
先在材料上滴上1滴濃鹽酸,然后滴上間苯三酚-酒精液1滴,木質化的細胞壁就染上櫻紅或紫紅色。
 
配方六 木質化細胞壁染液(Ⅲ)
取1克番紅,溶于99毫升蒸餾水中,即成1%番紅溶液。
 
4、細胞質染色劑
 
配方一 伊紅染液
伊紅染液一般配用水溶液和酒精溶液兩種。
(1)取1克伊紅,溶于99毫升蒸餾水中,即成1%伊紅水溶液(市售紅墨水內含伊紅成分,可以用紅墨水稀釋液來代替本溶液)。
(2)取1克伊紅,溶于99毫升70%酒精中,即成1%伊紅-酒精溶液。
 
配方二 甲基藍染液
取1克甲基藍,溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸餾水,即成1%甲基藍染液。
 
配方三 亮綠染液
取0.5克亮綠,溶解在100毫升蒸餾水中,即成0.5%亮綠溶液。
 
5、細胞核染色劑
 
配方一 甲基綠染液
取1克甲基綠,溶于99毫升蒸餾水中,加入1毫升冰醋酸。本染液能染細胞核,還用來染木質化細胞壁。
 
配方二 龍膽紫染液
取1克龍膽紫,溶于少量2%醋酸溶液中,加2%醋酸溶液,直到溶液不呈深紫色止。
 
配方三 美藍(亞甲基藍)染液
取0.5克美藍,溶于30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氫氧化鉀溶液,保存在棕色瓶內 。
此溶液能染細胞核,還用來染細菌、血和神經組織等。
 
配方四 硼砂-洋紅染液
取4克硼砂,溶于96毫升蒸餾水中。再加入2克洋紅,加熱溶解后煮沸30分鐘,靜置3日,用100毫升70%酒精沖淡,放置24小時后過濾。
此染液能染細胞核,還用來染糊粉粒和一般動物、植物的整體染色,如水螅、血吸蟲等整體標本。
 
配方五 德氏(Delafield's)蘇木精染液
甲液 取1蘇木精,溶于6毫升無水酒精中,即成蘇木精-酒精溶液。
乙液 取10克銨礬溶于90毫升蒸餾水中,即成10%銨礬水溶液。
取甲液逐滴加入到乙液中,用紙遮蓋,放在陽光明亮處,使它充分氧化。3~4天后將溶液過濾,在濾液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇,保存在密閉玻璃瓶內。靜置1~2個月,待該液顏色變深時過濾,可長久保存。
本染液是染色體的優良染色劑,除能染細胞核外,還用來染纖維素、細胞壁和動植物組織。
 
配方六 席夫(Schiff's)試劑
稱取0.5克堿性品紅,加到100毫升煮沸的蒸餾水中,再微微加熱5分鐘,不斷攪拌,使它溶解。在溶液冷卻到50攝氏度時過濾,濾液中加入10毫升1N鹽酸。再冷卻到25攝氏度時加入0.5克偏重亞硫酸鈉或無水亞硫酸氫鈉。把溶液裝入棕色試劑瓶內,搖蕩后,塞緊瓶塞,放在黑暗中24小時。在溶液顏色退到淡黃色時,加入0.5克活性炭,用力搖蕩1分鐘,過濾后把濾液貯在棕色試劑瓶內,塞緊瓶塞,濾液應該是無色的。在使用時勿讓溶液長時間暴露在空氣中和見光(瓶外用黑紙或暗盒遮光)。如溶液變成紅色,即失去染色能力。
堿性品紅是較強的核染色劑,在孚爾根氏(Feulgen's)反應中作為組織化學試劑,以檢查DNA。
 
6、染色體染色劑
 
配方一 醋酸-洋紅染液
取45毫升冰醋酸,加蒸餾水55毫升,煮沸后徐徐加入洋紅1克,攪拌均勻后加入1顆鐵銹釘,煮沸10分鐘,冷卻后過濾,貯存在棕色瓶內。
 
配方二 醋酸-地衣紅染液
取45毫升醋酸,跟55毫升蒸餾水相混,加熱,徐徐加入地衣紅粉末1~2克,攪拌溶解后,緩緩煮沸2小時。冷卻后過濾,貯存在棕色瓶里。
 
配方三 龍膽紫染液
取1克龍膽紫,用少量蒸餾水溶解后,加蒸餾水,稀釋到100毫升,保存在棕色瓶內。
 
配方四 甲苯胺藍染液
取0.5克甲苯胺藍,溶解在100毫升蒸餾水中,即成0.5%甲苯胺藍水溶液。
 
7、線粒體染色劑
 
配方一 詹鈉斯綠B(Janu's green B)酒精飽和溶液
取125毫升詹鈉斯綠B,加入到62.5毫升無水酒精中,攪拌,即成煙魯綠B酒精飽和染液。
(1)取詹鈉斯綠酒精飽和染液按1:30000比例加蒸餾水稀釋,用來染原生動物線粒體。
(2)取詹鈉斯綠酒精飽和液,按1:10000比例加蒸餾水稀釋,用來染新鮮蛙血線粒體。
 
配方二 詹鈉斯綠B中性紅染液
先配制詹鈉斯綠B和中性紅酒精飽和液。詹鈉斯綠酒精飽和液見配方一。中性紅酒精飽和液配制方法:取125毫升中性紅,加入到50毫升無水酒精中,攪拌。
在10毫升生理鹽水(兩棲類生理鹽水濃度為0.65%;哺乳類生理鹽水濃度為0.9%)中,加入詹鈉斯綠B酒精飽和液0.7~1毫升,中性紅酒精飽和液2毫升,混合。
詹鈉斯綠B稀釋液是活體染液。
 
8、脂肪染色劑
 
蘇丹Ⅲ染液
取0.1克蘇丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%蘇丹Ⅲ染液。
這染液能染脂肪,還能染木栓、角質層。
 
9、血液染色劑
 
配方一 瑞氏(Wright's)染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研缽內,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干凈的棕色玻璃瓶。并用完甲醇為止。配制好的染液在室溫中保存,即可使用。新鮮配制的染液偏堿性,放置后呈酸性,染液貯存愈久染色愈好。這染液的適宜pH值是6.4~6.8。因此,染色時加入緩沖液,可維持一定的酸堿度,使染色效果更好。
這種染液除能染血液,還能染瘧原蟲。
 
瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氫鈉水溶液里加入1克美藍,溶解后放在鍋內,蒸上1小時,取出冷卻后過濾。在濾液里加入0.1%伊紅水溶液500毫升,隨加、隨攪拌,使混合液呈紫色。靜置一夜后,用濾紙過濾。濾紙上的沉淀物,在室內風干或放在干燥箱內,充分干燥后研磨成粉末,即成瑞氏染料。
 
配方二 甲基紫染液
取甲基紫0.5克,加到100毫升生理鹽水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。
 
10、吸蟲染色劑
 
梅耶氏(Mayer's )明礬-洋紅染液
取銨明礬(硫酸鋁銨)5克,溶于95毫升蒸餾水中,再加入0.5克洋紅酸,加熱溶解,冷卻后過濾。在濾液中加入少量防腐劑,如麝香草酚、樟腦粉、水楊酸鈉、苯酚(石炭酸)等,以防生霉。
這種染液適合于染小型動物材料,如吸蟲等寄生蟲的整體,也能染高等植物的表皮和蕨類植物的原葉體。
 
11、活體染色劑
 
配方一 中性紅染液
先配成1%中性紅水溶液(1克中性紅溶于100毫升蒸餾水中)。取這種溶液1毫升,用0.6%生理鹽水(或蒸餾水)稀釋到50毫升,即成0.02%中性紅水溶液,貯存在棕色瓶里,放在黑暗處。
本染液用來顯示原生動物的食物泡以及動植物組織中活細胞的內含物等。
 
配方二 尼羅藍(Nile Blue)染液
取0.1克尼羅藍,溶解于1000~1500毫升蒸餾水中,即成尼羅藍染液。
這種染液能把原生動物大核染成綠色,食物泡染成藍色。
 
配方三 亞甲藍染液
取0.1克亞甲藍,溶解于1000毫升蒸餾水中,即成亞甲藍染液。
這種染液用于原生動物的活體染色。
 
12、透明骨骼標本染色劑
 
配方一 茜素紅染液(Ⅰ)
取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在這種混合液中方入少量茜素紅,制成茜素紅飽和溶液。
 
配方二 茜素紅溶液(Ⅱ)
取1克茜素紅,溶于100毫升95%酒精中,攪拌,然后跟900毫升1%氫氧化鉀溶液相混,即成深紫色的茜素紅染液。

 

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